Protein dalam urin: metode untuk menentukan

Proteinuria patologis adalah salah satu tanda paling penting dan permanen dari penyakit ginjal dan saluran kemih. Penentuan konsentrasi protein urin merupakan elemen penting dan penting dari pengujian urin. Identifikasi dan penilaian kuantitatif proteinuria penting tidak hanya dalam diagnosis banyak penyakit ginjal primer dan sekunder, penilaian perubahan dalam keparahan proteinuria dalam dinamika membawa informasi tentang jalannya proses patologis, tentang efektivitas pengobatan. Deteksi protein dalam urin, bahkan dalam jumlah sedikit, harus mengkhawatirkan kemungkinan penyakit ginjal atau saluran kemih dan membutuhkan analisis ulang. Dari catatan khusus adalah tidak masuk akal penelitian urin dan, khususnya, penentuan protein urin tanpa mematuhi semua aturan untuk pengumpulannya.

Semua metode untuk menentukan protein dalam urin dapat dibagi menjadi:

  • Kualitas,
  • Semi kuantitatif
  • Kuantitatif.

Metode kualitatif

Semua sampel protein urin berkualitas tinggi didasarkan pada kemampuan protein untuk mengalami denaturasi di bawah pengaruh berbagai faktor fisik dan kimia. Di hadapan protein dalam sampel urin, ada kekeruhan atau hilangnya sedimen flokulan.

Kondisi untuk menentukan protein dalam urin berdasarkan reaksi koagulasi:

  1. Air seni harus bersifat asam. Urin alkali diasamkan dengan beberapa (2-3) tetes asam asetat (5-10%).
  2. Air seni harus jernih. Kekeruhan dieliminasi melalui filter kertas. Jika kekeruhan tidak hilang, tambahkan talc atau magnesia yang terbakar (sekitar 1 sendok teh per 100 ml urin), kocok dan saring.
  3. Tes kualitatif harus dilakukan dalam dua tabung, salah satunya - kontrol.
  4. Pencarian kekeruhan harus pada latar belakang hitam dalam cahaya yang ditransmisikan.

Metode kualitatif untuk menentukan protein dalam urin meliputi:

Seperti yang ditunjukkan oleh berbagai penelitian, tidak ada satu pun dari sejumlah besar metode yang diketahui untuk penentuan kualitatif protein dalam urin memungkinkan untuk mendapatkan hasil yang andal dan dapat direproduksi. Meskipun demikian, di sebagian besar CDL di Rusia, metode ini banyak digunakan sebagai skrining - dalam urin dengan respons kualitatif positif, kuantisasi protein lebih lanjut dilakukan. Dari reaksi kualitatif, tes Geller dan sampel dengan asam sulfosalisilat lebih umum digunakan, namun sampel dengan asam sulfosalisilat sebagian besar dianggap paling cocok untuk mendeteksi proteinuria patologis. Tes pendidihan saat ini praktis tidak digunakan karena kesulitan dan durasinya.

Metode semi-kuantitatif

Metode Brandberg-Roberts-Stolnikov didasarkan pada tes cincin Geller, sehingga kesalahan yang sama diamati dengan metode ini seperti halnya dengan tes Geller.

Saat ini, strip diagnostik semakin banyak digunakan untuk menentukan protein urin. Untuk penentuan protein semi-kuantitatif dalam urin pada strip, pewarna yang paling umum digunakan adalah bromophenol blue dalam buffer sitrat. Kandungan protein dalam urin dinilai oleh intensitas warna biru-hijau, yang berkembang setelah kontak dengan zona reaksi dengan urin. Hasilnya dinilai secara visual atau menggunakan analisis urin. Terlepas dari popularitas besar dan keuntungan nyata dari metode kimia kering (kesederhanaan, kecepatan analisis), metode urinalisis ini secara umum dan penentuan protein khususnya bukan tanpa kelemahan serius. Salah satunya, yang mengarah ke distorsi informasi diagnostik, adalah sensitivitas indikator bromophenol blue yang lebih besar terhadap albumin dibandingkan dengan protein lain. Dalam hal ini, strip uji terutama disesuaikan dengan deteksi proteinuria glomerulus selektif, ketika hampir semua protein urin diwakili oleh albumin. Dengan perkembangan perubahan dan transisi proteinuria glomerulus selektif ke non-selektif (munculnya globulin dalam urin), hasil penentuan protein diremehkan dibandingkan dengan nilai sebenarnya. Fakta ini membuat mustahil untuk menggunakan metode ini untuk menentukan protein dalam urin untuk menilai keadaan ginjal (filter glomerulus) dari waktu ke waktu. Pada proteinuria tubular, hasil penentuan protein juga diremehkan. Penentuan protein menggunakan strip diagnostik bukan merupakan indikator andal dari kadar proteinuria yang rendah (sebagian besar strip diagnostik yang tersedia saat ini tidak memiliki kemampuan untuk menangkap protein dalam urin dengan konsentrasi lebih rendah dari 0,15 g / l). Hasil negatif dari penentuan protein pada garis tidak mengecualikan keberadaan dalam urin globulin, hemoglobin, uromucoid, protein Bens-Jones dan paraprotein lainnya.

Serpihan lendir dengan kandungan glikoprotein yang tinggi (misalnya, dalam proses inflamasi di saluran kemih, piuria, bakteriuria) dapat menetap di zona indikator strip dan menyebabkan hasil positif palsu. Hasil positif palsu juga dapat dikaitkan dengan urea konsentrasi tinggi. Pencahayaan yang buruk dan persepsi warna yang buruk dapat menyebabkan hasil yang tidak akurat.

Dalam hal ini, penggunaan strip diagnostik harus dibatasi pada prosedur penyaringan, dan hasil yang diperoleh dengan bantuan mereka harus dianggap hanya sebagai indikasi.

Metode kuantitatif

Penentuan kuantitatif protein dalam urin yang benar dalam beberapa kasus bukanlah tugas yang mudah. Kesulitan solusinya ditentukan oleh sejumlah faktor berikut:

  • kadar protein rendah dalam urin orang sehat, sering pada ambang sensitivitas metode yang paling dikenal;
  • kehadiran dalam urin banyak senyawa yang dapat mengganggu jalannya reaksi kimia;
  • fluktuasi yang signifikan dalam kandungan dan komposisi protein urin dalam berbagai penyakit yang membuatnya sulit untuk memilih bahan kalibrasi yang memadai.

Di laboratorium klinis, metode yang disebut "rutin" untuk menentukan protein dalam urin sebagian besar digunakan, tetapi mereka tidak selalu memberikan hasil yang memuaskan.

Dari sudut pandang analis spesialis yang bekerja di laboratorium, metode yang dimaksudkan untuk penentuan kuantitatif protein urin harus memenuhi persyaratan berikut:

  • memiliki hubungan linier antara penyerapan kompleks yang terbentuk selama reaksi kimia dan kandungan protein dalam sampel dalam berbagai konsentrasi, sehingga menghindari operasi tambahan dalam menyiapkan sampel untuk penelitian;
  • harus sederhana, tidak memerlukan pemain yang sangat terampil, dilakukan dengan sejumlah kecil operasi;
  • memiliki sensitivitas tinggi, keandalan analitis ketika menggunakan sejumlah kecil bahan yang dipelajari;
  • tahan terhadap berbagai faktor (variasi komposisi sampel, keberadaan obat, dll.);
  • memiliki biaya yang dapat diterima;
  • mudah beradaptasi dengan analisa otomatis;
  • hasil dari penentuan seharusnya tidak tergantung pada komposisi protein dari sampel urin.

Tak satu pun dari metode yang diketahui saat ini untuk penentuan kuantitatif protein dalam urin dapat sepenuhnya mengklaim sebagai "standar emas."

Metode kuantitatif untuk menentukan protein dalam urin dapat dibagi menjadi turbidimetri dan kolorimetri.

Metode turbidimetri

Metode turbidimetri meliputi:

  • penentuan protein dengan asam sulfosalisilat (SSC),
  • penentuan protein dengan asam trikloroasetat (THC),
  • penentuan protein dengan benzethonium chloride.

Metode turbidimetri didasarkan pada pengurangan kelarutan protein urin karena pembentukan suspensi partikel tersuspensi di bawah pengaruh zat pengendap. Kandungan protein dalam sampel uji ditentukan oleh intensitas hamburan cahaya, ditentukan oleh jumlah partikel hamburan cahaya (metode analisis nefelometrik), atau dengan pelemahan fluks cahaya oleh suspensi yang dihasilkan (metode analisis turbidimetri).

Besarnya hamburan cahaya dalam metode pengendapan untuk mendeteksi protein dalam urin tergantung pada banyak faktor: kecepatan pencampuran reagen, suhu campuran reaksi, pH medium, keberadaan senyawa asing, metode fotometri. Kepatuhan hati-hati terhadap kondisi reaksi berkontribusi terhadap pembentukan suspensi stabil dengan ukuran partikel konstan dan memperoleh hasil yang relatif dapat direproduksi.

Beberapa obat memengaruhi hasil metode turbidimetri untuk menentukan protein dalam urin, yang mengarah ke hasil yang disebut "false-positive" atau "false-negative". Ini termasuk beberapa antibiotik (benzylpenicillin, cloxacillin, dll.), Zat yang mengandung yodium radiopak, obat sulfa.

Metode turbidimetri tidak terstandarisasi, sering mengarah pada hasil yang salah, tetapi meskipun demikian, metode ini sekarang banyak digunakan di laboratorium karena biaya rendah dan ketersediaan reagen. Metode yang paling banyak digunakan di Rusia adalah penentuan protein dengan asam sulfosalisilat.

Metode kolorimetri

Yang paling sensitif dan akurat adalah metode kolorimetri untuk menentukan protein total urin, berdasarkan reaksi protein warna tertentu.

Ini termasuk:

  1. reaksi biuret,
  2. Metode Lowry
  3. metode berdasarkan kemampuan berbagai pewarna untuk membentuk kompleks dengan protein:
    • Ponceau S (Ponceau S),
    • Coomassie Brilliant Blue Coomassie Brilliant Blue
    • Pyrogallol merah.

Dari sudut pandang pelaku, dalam pekerjaan sehari-hari laboratorium dengan aliran penelitian yang besar, metode biuret tidak nyaman karena banyaknya operasi. Pada saat yang sama, metode ini ditandai dengan keandalan analitis yang tinggi, memungkinkan penentuan protein dalam berbagai konsentrasi dan mendeteksi albumin, globulin dan paraprotein dengan sensitivitas yang sebanding, sebagai akibatnya metode biuret dianggap sebagai referensi dan direkomendasikan untuk perbandingan metode analitik lain untuk mendeteksi protein dalam urin. Metode biuret untuk menentukan protein dalam urin lebih disukai dilakukan di laboratorium yang melayani departemen nefrologi, dan digunakan dalam kasus di mana hasil penentuan menggunakan metode lain dipertanyakan, serta untuk menentukan jumlah kehilangan protein harian pada pasien nefrologi.

Metode Lowry, yang memiliki sensitivitas lebih tinggi daripada metode biuret, menggabungkan reaksi biuret dan reaksi Folin terhadap asam amino tirosin dan triptofan dalam molekul protein. Meskipun sensitivitasnya tinggi, metode ini tidak selalu memberikan hasil yang dapat diandalkan ketika menentukan kandungan protein dalam urin. Alasan untuk ini adalah interaksi non-spesifik dari reagen Folin dengan komponen urin non protein (paling sering asam amino, asam urat, karbohidrat). Pemisahan ini dan komponen urin lainnya dengan dialisis atau presipitasi protein memungkinkan seseorang untuk berhasil menggunakan metode ini untuk penentuan kuantitatif protein urin. Beberapa obat - salisilat, klorpromazin, tetrasiklin dapat memengaruhi metode ini dan mendistorsi hasil penelitian.

Sensitivitas yang memadai, reproduktifitas yang baik dan kemudahan menentukan protein dengan mengikat pewarna membuat metode ini menjanjikan, tetapi biaya tinggi reagen mencegah penggunaannya yang lebih luas di laboratorium. Saat ini, metode merah pyrogallol menjadi lebih umum di Rusia.

Ketika melakukan penelitian tingkat proteinuria, harus diingat bahwa metode yang berbeda untuk menentukan proteinuria memiliki sensitivitas dan spesifisitas yang berbeda dengan banyak protein urin.

Berdasarkan data empiris, disarankan untuk menentukan protein dengan dua metode berbeda dan menghitung nilai sebenarnya menggunakan salah satu dari rumus berikut:

proteinuria = 0,4799 B + 0,5230 L;
proteinuria = 1,5484 B - 0,4825 S;
proteinuria = 0,2167 S + 0,7579 L;
proteinuria = 1,0748 P - 0,0986 B;
proteinuria = 1,0104 P - 0,0289 S;
proteinuria = 0,8959 P + 0,0845 L;

dimana:
B - hasil pengukuran dengan Coomassie G-250;
L adalah hasil pengukuran dengan reagen Lowry;
P - hasil pengukuran dengan pyrogallol molybdate;
S adalah hasil pengukuran dengan asam sulfosalisilat.

Mempertimbangkan fluktuasi yang jelas pada tingkat proteinuria pada waktu yang berbeda dalam sehari, serta ketergantungan konsentrasi protein urin pada diuresis, kandungannya yang berbeda dalam porsi urin individu, sekarang umum bagi patologi ginjal untuk menilai tingkat keparahan proteinuria oleh hilangnya protein harian dalam urin, yaitu, untuk menentukan apa yang disebut proteinuria harian. Ini dinyatakan dalam g / hari.

Jika tidak mungkin untuk mengumpulkan urin setiap hari, disarankan untuk menentukan konsentrasi protein dan kreatinin dalam satu porsi urin. Karena laju pelepasan kreatinin pada siang hari cukup konstan dan tidak tergantung pada perubahan laju buang air kecil, rasio konsentrasi protein terhadap konsentrasi kreatinin konstan. Rasio ini berkorelasi baik dengan ekskresi protein harian dan, oleh karena itu, dapat digunakan untuk menilai tingkat keparahan proteinuria. Rasio protein / kreatinin normal harus kurang dari 0,2. Protein dan kreatinin diukur dalam g / l. Keuntungan penting dari metode penilaian keparahan proteinuria dengan rasio protein-kreatinin adalah penghapusan kesalahan yang berhubungan dengan ketidakmampuan atau pengumpulan urin harian yang tidak lengkap.

Sastra:

  • O. V. Novoselova, M. B. Pyatigorskaya, Yu. E. Mikhailov, "Aspek Klinis Deteksi dan Evaluasi Proteinuria", Buku Pegangan Kepala CPL, No. 1, Januari 2007
  • A. V. Kozlov, "Proteinuria: metode untuk pendeteksiannya", kuliah, St. Petersburg, SPbMAPO, 2000
  • VL Emanuel, “Laboratorium diagnosis penyakit ginjal. Sindrom Urin ”, - Buku Pegangan Kepala KDL, No. 12, Desember 2006
  • V.I. Pupkova, L.M. Prasolov - Penentuan protein dalam urin dan cairan serebrospinal. Koltsovo, 2007
  • Buku pegangan metode penelitian laboratorium klinis. Ed. E. A. Kost. Moskow, "Kedokteran", 1975

Artikel terkait

Metode kuantitatif untuk menentukan protein urin total

Setiap sampel urin cocok untuk kuantifikasi protein. Sebagian besar peneliti lebih suka menentukan jumlah protein dalam urin yang dikumpulkan per hari untuk memastikan hilangnya protein setiap hari.

Bagian: Analisis Urin

Metode semi kuantitatif untuk penentuan protein total dalam urin

Saat ini, strip diagnostik semakin banyak digunakan untuk menentukan protein urin. Untuk penentuan protein semi-kuantitatif dalam urin pada strip, pewarna yang paling umum digunakan adalah bromophenol blue dalam buffer sitrat. Kandungan protein dalam urin dinilai oleh intensitas warna biru-hijau, yang berkembang setelah kontak dengan zona reaksi dengan urin.

Bagian: Analisis Urin

Metode kualitatif untuk menentukan protein total dalam urin

Semua sampel protein urin berkualitas tinggi didasarkan pada kemampuan protein untuk mengalami denaturasi di bawah pengaruh berbagai faktor fisik dan kimia. Di hadapan protein dalam sampel urin, ada kekeruhan atau hilangnya sedimen flokulan.

Bagian: Analisis Urin

Penentuan protein urin dalam sampel dengan asam sulfosalisilat 20%

Sampel dengan asam sulfosalisilat 20% mengacu pada reaksi kualitatif untuk penentuan protein dalam urin. Karena didasarkan pada reaksi koagulasi, urin yang diuji harus memenuhi persyaratan tertentu: transparan dan memiliki reaksi asam.

Bagian: Analisis Urin

Uji dering Geller

Tes cincin Geller adalah reaksi kualitatif untuk menentukan protein urin. Karena didasarkan pada reaksi koagulasi, urin yang diuji harus memenuhi persyaratan tertentu: transparan dan memiliki reaksi asam.

Bagian: Analisis Urin

Metode untuk penentuan protein dalam urin

Sejumlah kecil protein dalam urin harian juga ditemukan pada individu yang benar-benar sehat, namun konsentrasi kecil tersebut tidak terdeteksi dalam porsi tunggal menggunakan metode yang saat ini digunakan. Sekitar 70% dari protein urin dari orang sehat merupakan uromucoid, protein yang merupakan produk dari jaringan ginjal; dengan demikian, proporsi protein glomerulus dalam urin orang sehat dapat diabaikan dan proteinuria normalnya adalah 50–150 mg / hari, dengan sebagian besar protein urin identik dengan whey.

Ini diterima untuk membedakan bentuk-bentuk proteinuria berikut tergantung pada tempat asal: prerenal, terkait dengan pemecahan protein jaringan yang ditingkatkan, hemolisis parah; ginjal, karena patologi ginjal, yang dapat dibagi menjadi glomerulus dan tubular; postrenal, berhubungan dengan patologi saluran kemih dan paling sering disebabkan oleh eksudasi inflamasi.


Tergantung pada lamanya keberadaan, mereka memancarkan proteinuria persisten, yang ada selama berminggu-minggu bahkan bertahun-tahun, dan sementara, muncul secara berkala, kadang-kadang bahkan tanpa adanya penyakit ginjal, misalnya, dengan demam dan keracunan parah. Dianjurkan untuk membedakan antara variabilitas proteinuria: dengan kehilangan protein harian hingga 1 g - sedang, dari 1 hingga 3 g - sedang dan lebih dari 3 g - diucapkan.

Deteksi urin protein dengan berat molekul yang relatif besar menunjukkan tidak adanya selektivitas filter ginjal dan kerusakannya yang nyata. Dalam kasus ini, bicarakan selektivitas proteinuria yang rendah. Oleh karena itu, saat ini, definisi fraksi protein urin telah menjadi luas. Metode yang paling akurat adalah elektroforesis dalam gel pati dan poliakrilamida.
Menurut hasil yang diperoleh dengan metode ini, seseorang dapat menilai selektivitas proteinuria.

Sebagian besar metode kualitatif dan kuantitatif untuk menentukan protein dalam urin didasarkan pada koagulasi dalam volume urin atau pada antarmuka antara media (urin dan asam); jika ada cara untuk mengukur intensitas koagulasi, maka sampel menjadi kuantitatif.

Uji asam sulfosalisilat terpadu:

Reagen yang dibutuhkan:

20% larutan asam sulfosalisilat.

Kursus studi:

Dalam 2 tabung reaksi tuangkan 3 ml urine yang disaring. Dalam tabung reaksi tambahkan 6-8 tetes reagen. Pada latar belakang gelap, bandingkan tabung kontrol dengan yang berpengalaman. Kekeruhan dalam tabung reaksi menunjukkan adanya protein, sampel dianggap positif.

Jika reaksi urin bersifat basa, maka sebelum pemeriksaan itu diasamkan dengan 2-3 tetes larutan asam asetat 10% berair.

Metode Terpadu Brandberg-Roberts-Stolnikov:

Metode ini didasarkan pada sampel cincin Geller, yang terdiri dari fakta bahwa di perbatasan asam nitrat dan urin, dengan adanya protein, koagulasi terjadi dan cincin putih muncul.

Reagen yang dibutuhkan:

30% larutan asam nitrat (kerapatan relatif 1,2) atau reagen Larionic.
Persiapan reagen Larion: 20-30 g natrium klorida dilarutkan dengan memanaskan dalam 100 ml air suling, dibiarkan dingin, disaring. Untuk 99 ml filtrat dituangkan 1 ml asam nitrat pekat.

Kursus studi:

1-2 ml asam nitrat (atau reagen asam Larionic) dituangkan ke dalam tabung dan dengan hati-hati, di atas dinding tabung, jumlah urin yang disaring sama. Munculnya cincin putih tipis pada antarmuka dua cairan antara menit ke-2 dan ke-3 menunjukkan adanya protein pada konsentrasi sekitar 0,033 g / l. Jika cincin muncul lebih awal dari 2 menit setelah pelapisan, urin harus diencerkan dengan air dan pelapisan ulang dari urin yang sudah diencerkan. Tingkat pengenceran urin dipilih tergantung pada jenis cincin, mis. lebarnya, kekompakan dan waktu penampilan. Dengan cincin seperti benang, yang muncul lebih awal 2 menit, urin diencerkan 2 kali, dengan yang lebar - 4 kali, dengan yang ringkas - 8 kali, dll. Konsentrasi protein dihitung dengan mengalikan 0,033 dengan tingkat pengenceran dan dinyatakan dalam gram per 1 l (g / l).

Kadang-kadang cincin putih diperoleh saat jumlah besar urat hadir. Berbeda dengan cincin protein, urat sedikit lebih tinggi dari batas antara dua cairan dan larut ketika sedikit dipanaskan.

Penentuan kuantitatif protein dalam urin dengan kekeruhan, dibentuk oleh penambahan asam sulfosalisilat:

Prinsip metode:

Intensitas kekeruhan selama pembekuan protein dengan asam sulfosalisilat sebanding dengan konsentrasinya.

Reagen yang diperlukan:

1. 3% larutan asam sulfosalisilat.

2. 0,9% larutan natrium klorida.

3. Larutan albumin standar - larutan 1% (1 ml larutan yang mengandung 10 mg albumin): 1 g albumin terliofilisasi (dari serum manusia atau sapi) dilarutkan dalam sejumlah kecil larutan natrium klorida 0,9% dalam labu dengan kapasitas 100 ml, lalu disesuaikan dengan tanda dengan larutan yang sama. Pereaksi distabilkan dengan menambahkan 1 ml larutan natrium azida 5% (NaN3). Ketika disimpan dalam lemari es, reagen ini berlaku selama 2 bulan.

Peralatan khusus - kolorimeter fotolistrik.

Kursus studi:

1,25 ml urin yang disaring dituangkan ke dalam tabung, dibuat hingga 5 ml dengan larutan asam sulfosalisilat 3%, dan dicampur. Setelah 5 menit, mereka diukur pada colorimeter fotolistrik pada panjang gelombang 590-650 nm (filter cahaya oranye atau merah) terhadap kontrol dalam sel dengan panjang jalur optik 5 mm. Kontrol adalah tabung di mana untuk 1,25 ml urin yang disaring ditambahkan hingga 5 ml larutan natrium klorida 0,9%. Perhitungan dilakukan sesuai dengan jadwal kalibrasi, untuk konstruksi yang pengenceran disiapkan dari solusi standar, seperti yang ditunjukkan dalam tabel.

Dari setiap larutan yang dihasilkan, 1,25 ml diambil dan diperlakukan sebagai sampel percobaan.

Ketergantungan bujursangkar saat membuat grafik kalibrasi disimpan hingga 1 g / l. Pada konsentrasi yang lebih tinggi, sampel harus diencerkan dan memperhitungkan pengenceran dalam perhitungan.

Hasil positif palsu dapat diperoleh jika ada agen kontras dalam urin yang mengandung yodium organik. Oleh karena itu, tes tidak dapat digunakan pada orang yang mengambil persiapan yodium; hasil positif palsu mungkin juga disebabkan oleh sediaan sulfanilamide, dosis besar penisilin, dan pada konsentrasi tinggi dalam urin asam urat.

Metode biuret:

Prinsip metode:

Ikatan peptida protein dengan garam tembaga dalam alkali C membentuk kompleks warna ungu. Protein diendapkan sebelumnya dengan asam trikloroasetat.

Reagen yang diperlukan:

1. 10% larutan asam trikloroasetat.
2. 20% larutan tembaga (CuSO4 ∙ 5H2O).
3. 3% larutan NaOH.

Kursus studi:

Untuk 5 ml urin yang diambil dari jumlah harian, tambahkan 3 ml larutan asam trikloroasetat, disentrifugasi ke volume sedimen yang konstan. Supernatan disedot dengan pipet, endapan kemudian dilarutkan dalam 5 ml larutan NaOH. 0,25 ml CuSO4 ditambahkan ke dalam larutan, campuran diaduk dan disentrifugasi. Supernatan difotometri pada panjang gelombang 540 nm dalam kuvet dengan panjang jalur optik 10 mm terhadap air suling. Konsentrasi protein dihitung dari kurva kalibrasi, sementara memplotnya, konsentrasi protein (g / l) diplot pada sumbu y dan kepadatan optik dalam satuan kepunahan pada sumbu absis. Berdasarkan konsentrasi yang diperoleh, kehilangan harian protein dalam urin dihitung.

Menggunakan kertas indikator (strip):

Protein dapat dideteksi menggunakan kertas indikator (strip), yang diproduksi oleh "Albuphan", "Ames" (Inggris), "Albustix", "Boehringer" (Jerman), "Comburtest", dll.

Prinsipnya didasarkan pada fenomena yang disebut kesalahan protein dari beberapa indikator asam-basa. Bagian indikator kertas jenuh dengan tetrabromophenol biru dan buffer sitrat. Ketika kertas dibasahi, buffer larut dan memberikan pH yang sesuai untuk reaksi indikator.

Pada 3.0-3.5 gugus amino protein bereaksi dengan indikator dan mengubah warna kuning aslinya menjadi biru kehijauan, setelah itu, dibandingkan dengan skala warna, dimungkinkan untuk memperkirakan konsentrasi protein dalam urin secara kasar. Prasyarat utama untuk operasi yang benar dari strip indikator adalah untuk memberikan pH dalam kisaran 3,0-3,5 agar reaksi terjadi.

Jika kertas bersentuhan dengan urin yang diteliti lebih lama dari paparan yang ditentukan dalam instruksi, buffer sitrat larut di dalamnya, dan kemudian indikator bereaksi terhadap pH sebenarnya dari urin, yaitu. memberikan reaksi positif yang salah. Karena kenyataan bahwa kapasitas buffer terbatas, bahkan jika pedoman diikuti dalam sampel urin terlalu basa (pH> 6,5), hasil positif palsu diperoleh, dan dalam sampel urin terlalu asam (pH 6,5), dengan kepadatan relatif rendah urin dan protein bens jones dengan konsentrasi rendah.

Reagen yang diperlukan:

2 M buffer asetat pH 4,9.

Kursus studi:

Urin yang disaring dalam jumlah 4 ml dicampur dengan 1 ml buffer dan dipanaskan selama 15 menit dalam bak air pada suhu 56 ° C. Di hadapan protein Bens-Jones, endapan diucapkan muncul dalam waktu 2 menit, dan jika konsentrasi protein Bens-Jones kurang dari 3 g / l, sampel bisa negatif. Dalam praktiknya, ini sangat jarang, karena sebagian besar konsentrasi protein Bens-Jones dalam urin signifikan.

Dengan kepastian yang lengkap, protein Bens-Jones dapat dideteksi oleh studi immunoelectrophoretic menggunakan serum spesifik melawan rantai imunoglobulin yang berat dan ringan.

Penentuan albumosis (proteosis):

Albumosa adalah produk pembelahan protein, prinsip yang didasarkan pada fakta bahwa mereka tidak terlipat saat direbus, tetapi memberikan reaksi biuret positif dan diasinkan dengan beberapa garam, terutama amonium sulfat dan seng asetat dalam media asam.

Urin normal tidak mengandung albumosis. Jejak bisa dalam urin normal jika terjadi pengotor semen. Dalam patologi, albumosis dapat terjadi dalam urin selama kondisi demam, transfusi darah dan plasma, resorpsi eksudat dan transudat, dan disintegrasi tumor.

Reagen yang diperlukan:

1. Larutan natrium klorida jenuh.
2. Larutan soda kaustik pekat.
3. Larutan tembaga sulfat yang lemah (hampir tidak berwarna).

Kursus studi:

Larutan natrium klorida jenuh (1/3 volume) ditambahkan ke dalam urin yang diasamkan dengan asam asetat, direbus dan cairan panasnya disaring. Albumosa masuk ke dalam filtrat, di mana keberadaannya ditentukan oleh reaksi biuret. Pada filtrat, tambahkan 1/2 volume larutan pekat soda kaustik dan beberapa tetes larutan tembaga sulfat yang lemah. Dengan sampel positif, warna merah-ungu diperoleh.

Dengan tes positif dengan asam sulfosalisilat, urin dipanaskan. Jika kekeruhan menghilang dan muncul kembali ketika didinginkan, itu berarti bahwa urin mengandung albumosis atau tubuh protein Bens-Jones.

Protein dalam urin, tes laboratorium

Metode untuk penentuan protein urin

Untuk masalah klinik penentuan kualitatif dan kuantitatif protein dalam urin.

Tes kualitatif untuk menentukan protein urin
Diusulkan lebih dari 100 reaksi untuk penentuan kualitatif protein dalam urin. Sebagian besar didasarkan pada pengendapan protein dengan cara fisik (pemanasan) atau bahan kimia. Kehadiran protein dibuktikan dengan munculnya kekeruhan.

Yang juga menarik adalah sampel kering kolorimetri.

Di bawah ini akan dijelaskan hanya yang paling penting untuk praktik sampel.

Uji asam sulfosalisilat. Ke beberapa mililiter urin tambahkan 2-4 tetes larutan asam sulfosalisilat 20%. Ketika reaksi positif muncul kekeruhan. Hasilnya dilambangkan dengan istilah: opalescence, reaksi positif lemah, positif atau sangat positif. Tes asam sulfosalisilat adalah salah satu sampel paling sensitif untuk membentuk protein dalam urin. Dia menemukan bahkan peningkatan terkecil dalam protein urin. Berkat teknik yang sederhana, tes ini telah menemukan aplikasi luas.

Tes dengan aseptol. Aseptol adalah pengganti asam sulfosalisilat. Ini dapat dibuat dari bahan yang tersedia di laboratorium mana saja (fenol dan asam sulfat). Sebagai reagen, larutan aseptol 20% digunakan. Tes dilakukan sebagai berikut: dalam tabung reaksi yang mengandung 2-3 ml urin, tambahkan 0,5-1-1 ml larutan aseptol ke bagian bawah. Jika cincin putih protein terkoagulasi ternyata pada batas antara dua cairan, sampel positif.

Tes Geller. Di bawah beberapa mililiter urin, 1-2 ml asam nitrat 30% (berat jenis spesifik 1,20) diasinkan. Jika cincin putih diproduksi pada antarmuka kedua cairan, sampel positif. Reaksi menjadi positif jika protein lebih besar dari 3,3 mg%. Kadang-kadang cincin putih diperoleh saat jumlah besar urat hadir. Berbeda dengan cincin protein, cincin urat tidak muncul di perbatasan antara dua cairan, tetapi sedikit lebih tinggi. Larionova mengusulkan untuk menggunakan bukannya asam nitrat 30% sebagai larutan reagen 1% asam nitrat dalam larutan natrium klorida jenuh; Ini memberikan penghematan besar dalam asam nitrat.

Sampel dengan kalium dan asam asetat zhelezystosinerodisty. Reaksi ini memungkinkan untuk mengisolasi protein serum dari nukleoalbumin.

Jumlah urin yang sama dituangkan ke dalam dua tabung. Dalam salah satunya tambahkan beberapa tetes larutan asam asetat 30%. Jika kekeruhan diperoleh dibandingkan dengan tabung kontrol, urin mengandung nukleoalbumin. Jika tidak ada kekeruhan muncul, isi kedua tabung dicampur dan lagi dibagi menjadi dua bagian. Dalam salah satu dari dua tabung reaksi, tambahkan beberapa tetes (kelebihan dapat mengubah sampel positif menjadi negatif) dari larutan 10% garam darah kuning (sirup kalium ferrocyanide). Di hadapan protein whey, kekeruhan diperoleh.

Dengan urin pekat yang mengandung asam urat dan asam urat dalam jumlah besar, sampel dengan kalium besi dan sirup dan asam asetat harus dilakukan setelah pengenceran awal (2-3 kali) dari urin dengan air. Jika tidak, kekeruhan yang disebabkan oleh asam urat yang diendapkan dapat terjadi.

Ini sangat penting dalam studi urin pada bayi, yang mengandung banyak asam urat dan urat.

Dari sisa sampel kualitatif untuk protein dalam urin, berdasarkan curah hujan protein, mereka telah menemukan aplikasi: tes mendidih, Esbach, Perdi, Roberts, Almen, Balloni, Buro, Claudius, Corso, Dome, Goodmann-Suzanne, Jolla, Exton, Kamlet, Kobuladze, Liliendal-Petersen, Polacci, Pons, Spiegler, Tanre, Thiele, Brown, Tsushia, dll.

Dalam produksi sampel berkualitas tinggi untuk protein dalam urin, berdasarkan pada deposisi protein, perlu untuk mematuhi aturan umum berikut, pelanggaran yang mengarah pada kesalahan signifikan dalam penelitian.

1. Urin yang akan diuji harus bersifat asam. Dengan reaksi alkali, urin sedikit diasamkan dengan asam asetat. Produksi sampel dengan urin alkali, dalam kasus di mana asam digunakan sebagai reagen, dapat menyebabkan netralisasi asam dan ke hasil negatif dengan reaksi positif. Ini terutama benar untuk uji asam sulfosalisilat, karena asam ditambahkan dalam jumlah yang sangat kecil dan dapat dengan mudah dinetralkan.

2. Urin yang diselidiki harus transparan.

3. Sampel untuk membentuk protein dalam urin harus selalu dilakukan dalam dua tabung, salah satunya berfungsi sebagai kontrol. Tanpa tabung kontrol, orang mungkin tidak melihat kekeruhan ringan selama reaksi.

4. Jumlah asam yang ditambahkan dalam sampel tidak boleh terlalu besar. Sejumlah besar asam dapat menyebabkan pembentukan acidolbumin yang larut dan transformasi sampel positif menjadi negatif.

Karena tekniknya yang sederhana, sampel kering kolorimetri layak mendapat banyak perhatian. Ketika sampel ini digunakan, efek yang dimiliki protein terhadap warna indikator dalam larutan buffer (disebut indikator kesalahan protein). Kertas saring diresapi dengan buffer asam sitrat dan bromophenol biru sebagai indikator diserap ke dalam urin untuk waktu yang singkat. Sampel positif jika berubah warna biru-hijau. Membandingkan intensitas pewarnaan dengan standar kertas warna, dimungkinkan untuk memperoleh kesimpulan yang mendekati dan kuantitatif. Kertas indikator dijual dalam kemasan dengan standar warna yang sesuai, seperti kertas indikator universal.

Metode penentuan kuantitatif protein urin
Banyak metode telah diusulkan untuk penentuan kuantitatif protein urin. Metode kuantitatif yang tepat untuk penentuan protein dalam bahan biologis tidak banyak digunakan dalam penentuan protein dalam urin, karena teknik yang kompleks dan memakan waktu. Metode volumetrik tersebar luas, terutama metode Esbach. Mereka sangat sederhana, tetapi, sayangnya, tidak terlalu akurat. Metode kelompok Brandberg-Stolnikov, yang memberikan hasil lebih akurat daripada metode volumetrik, dengan teknik yang relatif sederhana, juga nyaman untuk klinik. Di hadapan fotometer atau nephelometer, metode nephelometrik juga nyaman.

Metode Esbach. Ia diusulkan oleh dokter Paris Esbach pada tahun 1874. Tuang urin dan reagen ke dalam tabung reaksi khusus (albuminometer Esbach). Tabung ditutup dengan sumbat karet, diaduk dengan seksama (tanpa pemukulan!) Dan dibiarkan dalam posisi tegak hingga hari berikutnya. Laporkan divisi, yang mencapai kolom endapan protein. Jumlah yang ditemukan menunjukkan kandungan protein. Sangat penting dengan metode Esbach bahwa urin bersifat asam. Urin alkali dapat menetralkan konstituen asam dari reagen dan mencegah pengendapan protein.

Keuntungan dari metode ini: sederhana dan nyaman dalam praktiknya.

Kekurangan: metode ini tidak akurat, hasilnya diperoleh setelah 24 - 48 jam.

Metode Brandberg-Stolnikov. Ini didasarkan pada uji kualitas Geller. Sampel Geller dapat digunakan untuk penentuan kuantitatif, karena memberikan hasil positif dengan kandungan protein di atas 3,3 mg%. Ini adalah konsentrasi protein tertinggi di bawah di mana sampel menjadi negatif.

Modifikasi Ehrlich dan Althausen. Ilmuwan Soviet S. L. Ehrlich dan A. Ya Altgauzen memodifikasi metode Brandberg-Stolnikov, menunjukkan kemungkinan menyederhanakan penelitian dan menghemat waktu dalam produksinya.

Penyederhanaan pertama dikaitkan dengan waktu penampilan cincin. Itu ditentukan tepat waktu penampilannya, tanpa harus mengikuti menit ke-2 dan ke-3.

Penyederhanaan kedua memungkinkan untuk menetapkan jenis pemuliaan apa yang harus dilakukan. Para penulis telah membuktikan bahwa pengenceran yang dibutuhkan kira-kira dapat ditentukan oleh jenis cincin yang diperoleh. Mereka membedakan berserabut, lebar
dan cincin kompak.

Dari metode nefelometrik, metode Kingsberry dan Clark patut dicatat. 2,5 ml air seni yang disaring dituangkan ke dalam sebuah silinder berskala kecil, diisi kembali dengan larutan asam sulfosalisilat 3% dalam air sampai 10 ml. Aduk rata dan, setelah 5 menit, fotometer dalam kuvet 1 cm, dengan filter kuning, menggunakan air sebagai cairan kompensasi. Dengan fotometer Pulfrich, kepunahan yang ditemukan, dikalikan 2,5, memberikan jumlah protein dalam% o. Dalam kasus ketika indeks kepunahan lebih tinggi dari 1,0, urin dilarutkan 2 kali, 4 kali atau bahkan lebih.

Untuk memiliki gagasan yang jelas tentang jumlah protein yang diekskresikan dalam urin, perlu untuk menentukan tidak hanya konsentrasi mereka dalam bagian urin yang terpisah, tetapi juga jumlah total harian mereka. Untuk melakukan ini, kumpulkan urin pasien selama 24 jam, ukur volumenya dalam mililiter, dan tentukan konsentrasi protein dalam porsi urin harian dalam g%. Jumlah protein yang diekskresikan dalam urin dalam 24 jam ditentukan tergantung pada jumlah harian urin dalam gram.

Signifikansi klinis protein dalam urin

Urin manusia biasanya mengandung jumlah protein minimal yang tidak dapat ditentukan oleh sampel pengujian protein urin kualitatif biasa. Ekskresi protein dalam jumlah besar, di mana sampel berkualitas tinggi biasa untuk protein dalam urin menjadi positif - sebuah fenomena abnormal, yang disebut proteinuria. Proteinuria hanya bersifat fisiologis pada bayi baru lahir, dalam 4-10 hari pertama setelah lahir. Nama albuminuria, yang biasa digunakan, salah, karena tidak hanya albumin, tetapi juga jenis protein lain (globulin, dll.) Diekskresikan dalam urin.

Proteinuria, sebagai gejala diagnostik, ditemukan pada 1770 oleh Cotuno.

Proteinuria ginjal fungsional yang paling penting pada anak-anak adalah sebagai berikut:

1. Proteinuria fisiologis bayi baru lahir. Ini terjadi pada kebanyakan bayi baru lahir dan tidak memiliki signifikansi yang merugikan. Ini dijelaskan oleh filter ginjal yang belum matang, kerusakan kelahiran, atau kehilangan cairan pada hari-hari pertama kehidupan. Proteinuria fisiologis menghilang pada hari 4-10 setelah lahir (pada bayi prematur kemudian). Jumlah proteinnya kecil. Ini adalah nukleoalbumin.

Albuminuria neonatal, yang berlangsung lama, bisa menjadi gejala dari bawaan bawaan.

2. Stroke albuminuria. Mereka disebabkan oleh melebihi ambang batas iritabilitas normal dari filter ginjal oleh iritasi mekanis, termal, kimia, mental dan lainnya yang signifikan - kehilangan cairan pada bayi (proteinuria dehidrasi), mandi air dingin, makanan kaya protein berlimpah (proteinuria alimenter), palpasi ginjal (palpatory albuminuria), kerja fisik yang berlebihan, ketakutan, dll.

Stroke albuminuria muncul lebih mudah pada anak-anak pada usia dini daripada pada anak-anak pada usia yang lebih tua dan pada orang dewasa, karena ginjal bayi dan anak muda lebih mudah teriritasi. Dehidrasi albuminuria (gangguan makan, hidrolabilitas, toksikosis, diare, muntah) terutama terjadi pada bayi.

Stroke albuminuria tidak berbahaya. Mereka menghilang segera setelah penghapusan penyebabnya. Leukosit, silinder, dan sel darah merah kadang-kadang ditemukan di sedimen. Protein paling sering adalah nukleoalbumin.

3. Proteinuria ortostatik. Kondisi ini adalah karakteristik anak-anak usia prasekolah dan sekolah. Ini terjadi atas dasar gangguan vasomotor dalam suplai darah ke ginjal. Khas untuk albuminuria ortostatik (karena itu namanya) adalah albuminuria hanya muncul ketika anak berdiri, ketika tulang belakang berada dalam posisi lordotik. Dalam posisi terlentang, itu menghilang. Nukleoalbumin dilepaskan. Dalam kasus yang meragukan, Anda dapat menggunakan pengalaman ortostatik, yang terdiri dari hal berikut: di malam hari, satu jam sebelum berbaring, anak mengosongkan kandung kemih; di pagi hari, bangun dari tempat tidur, dia kembali mengeluarkan air seni. Urin ini tidak mengandung protein. Kemudian si anak diletakkan di atas lututnya selama 15-30 menit dengan tongkat di belakang punggungnya, di antara kedua siku kedua tangan yang ditekuk. Ini menciptakan posisi lordosis, yang mengarah pada pelepasan protein, tanpa perubahan sedimen.

Dengan albuminuria ortostatik, 8-10 g protein dapat dilepaskan per hari.

Proteinuria ginjal organik sangat penting secara klinis antara semua proteinuria. Mereka disebabkan oleh penyakit ginjal organik (nefritis, nefrosis, nefrosklerosis). Proteinuria adalah salah satu gejala penyakit ginjal organik yang paling penting dan paling terkenal.

1. Pada glomerulonefritis akut dan kronis, proteinuria terjadi secara teratur. Jumlah proteinnya sedang, dan tidak ada paralel antara derajat proteinuria dan tingkat keparahan penyakit. Sebaliknya, batu giok kronis dan lebih parah sering terjadi dengan jumlah protein yang lebih kecil daripada akut. Setelah nefritis akut, kadang-kadang untuk waktu yang lama (bertahun-tahun), sejumlah kecil protein dalam urin terbentuk, tidak memiliki signifikansi patologis ("sisa albuminuria"). Tidak boleh dilupakan bahwa “nefritis tanpa proteinuria” juga dapat terjadi. Terkadang protein ditemukan di satu bagian urin, dan di bagian lain tidak. Rasio albumin terhadap globulin pada nefritis akut rendah, dan nefritis kronis lebih tinggi.

2. Dalam kasus nefrosklerosis, jumlah protein dalam urin cukup signifikan, sering kali merupakan bentuk penyakit tanpa protein dalam urin.

3. Dari semua penyakit ginjal, nefrosis terjadi dengan proteinuria yang paling jelas.

4. Dalam kasus kondisi infeksi dan toksik, proteinuria demam dan toksik ditemukan. Ini adalah nefrosis akut, di mana jumlah proteinnya kecil. Kelompok ini juga termasuk proteinuria dalam keadaan kejang (kejang), hipertiroidisme, penyakit kuning, invaginasi, enterokolitis, luka bakar, anemia berat, dll. Albuminuria ini jinak dan cepat berlalu (transient albuminuria).

5. Ketika darah mandek di ginjal, yang disebut albuminuria kongestif terjadi, yang merupakan karakteristik pasien kardiovaskular pada tahap dekompensasi. Ini juga ditemukan di asites dan tumor perut.

Dalam albuminuria demam, toksik, dan kongestif, peningkatan permeabilitas filter ginjal sangat terasa. Menurut beberapa penulis, banyak proteinuria ini terjadi tanpa kerusakan organik pada parenkim ginjal.

Albuminuria ekstrarenal biasanya disebabkan oleh pengotor protein (sekresi, sel yang rusak) yang disekresikan oleh saluran kemih yang sakit dan organ seks. Sering ditemukan albuminuria ekstrarenal akibat cystopielitis (piuria), lebih jarang akibat vulvovaginitis, kalkulus, dan tumor saluran kemih.

Ketika albuminuria ekstrarenal dalam sedimen menemukan sejumlah besar leukosit dan bakteri. Elemen ginjal hampir tidak pernah terjadi. Jumlah proteinnya kecil. Urin yang disaring atau disentrifugasi biasanya tidak memberikan sampel protein positif.

Pada orang yang pulih dari pielitis, albuminuria menghilang setelah bacteriuria dan pyuria.

Ini harus ditekankan sebagai fenomena karakteristik bahwa pada anak usia dini penyakit ginjal organik sangat langka, oleh karena itu, proteinuria organik juga jarang. Dari mereka ditemukan, terutama, demam dan beracun. Tidak seperti proteinuria organik, stroke albuminuria sangat umum terjadi pada anak kecil.

Pada anak yang lebih besar, proteinuria organik lebih sering berfungsi. Secara umum, seiring bertambahnya usia, proteinuria fungsional kurang umum, dan organik lebih sering.

Studi elektroforesis protein dalam urin

Sejumlah penulis menggunakan metode elektroforesis untuk mempelajari protein dalam urin (uroprotein). Dari electrophoregram yang diperoleh, jelas bahwa mereka memiliki komposisi kualitatif yang sama dengan protein plasma. Ini menunjukkan bahwa protein dalam urin berasal dari protein plasma.

Penentuan protein secara kualitatif dan kuantitatif dalam urin.

Nilai normal: protein normal dalam urin terkandung dalam jumlah minimal yang tidak terdeteksi oleh reaksi kualitatif yang biasa. Batas atas norma protein dalam urin adalah 0,033 g / l. Jika kandungan protein lebih tinggi dari nilai ini, maka sampel protein berkualitas tinggi menjadi positif.

Signifikansi klinis dari definisi:

Penampilan protein dalam urin disebut proteinuria. Proteinuria bisa salah dan ginjal. Proteinuria ekstrarenal dapat dengan adanya pengotor protein yang berasal dari organ genital (vaginitis, uretritis, dll.), Sementara jumlah protein tidak signifikan - hingga 0,01 g / l. Proteinuria ginjal dapat berfungsi (dengan hipotermia, aktivitas fisik, demam) dan organik - dengan glomerulonefritis, pielonefritis, nefritis, nefrosis, gagal ginjal. Pada proteinuria ginjal, kandungan proteinnya bisa dari 0,033 hingga 10-15 g / l, terkadang lebih tinggi.

Prinsip metode: didasarkan pada fakta bahwa protein di bawah aksi asam anorganik terkoagulasi (menjadi terlihat). Tingkat kekeruhan tergantung pada jumlah protein.

Deteksi protein dalam urin dengan asam sulfosalisilat 20%.

Reagen: larutan 20% asam sulfosalisilat. Peralatan: latar belakang gelap.

1. Persyaratan untuk urin: urin harus bersifat asam (atau sedikit asam) pH, harus transparan, untuk tujuan ini, urin disentrifugasi. Urin alkali diasamkan ke media reaksi asam lemah, menggunakan kertas indikator untuk kontrol.

2. Dalam 2 tabung reaksi dengan diameter yang sama tuangkan 2 ml urin yang disiapkan. 1 tabung reaksi - kontrol, 2 - pengalaman. Ke tabung reaksi tambahkan 4 tetes asam sulfosalisilat 20%.

3. Hasilnya ditandai pada latar belakang gelap.

4. Dengan adanya protein, urin dalam tabung reaksi tumbuh keruh.

Penentuan protein dalam urin berkualitas tinggi dengan strip tes.

Untuk mengidentifikasi proteinuria, berbagai strip monotest digunakan: Albufan, Albustiks, Biofan E dan tes politik: Triscan, Nonafan, dan lainnya.

Deteksi protein dalam urin dengan metode Roberts - Stolnikov.

Prinsip metode: didasarkan pada fakta bahwa protein di bawah aksi asam anorganik terkoagulasi (menjadi terlihat). Tingkat kekeruhan tergantung pada jumlah protein (mis., Tes cincin Geller). Ketika konsentrasi protein dalam urin adalah 0,033 g / l, pada akhir 3 menit setelah pelapisan urin muncul benang putih tipis.

Reagen: larutan asam nitrat 50% atau reagen Roberts (98 bagian larutan jenuh natrium klorida dan 2 bagian asam klorida pekat) atau reagen Larionic (98 bagian larutan natrium klorida jenuh dan 2 bagian asam nitrat pekat).

Peralatan: latar belakang gelap.

1. Persyaratan untuk urin: urin harus bersifat asam (atau sedikit asam) pH, harus transparan, untuk tujuan ini, urin disentrifugasi. Urin alkali diasamkan ke media reaksi asam lemah, menggunakan kertas indikator untuk kontrol.

2. Tuang 2 ml larutan asam nitrat 50% atau salah satu reagen ke dalam tabung reaksi, lalu tuangkan volume urin yang disiapkan dengan hati-hati di sepanjang dinding tabung dengan pipet.

3. Sampel dibiarkan selama 3 menit

4. Setelah 3 menit, laporkan hasilnya. Hasilnya ditandai pada latar belakang gelap dalam cahaya yang ditransmisikan. Jika cincin itu lebar, padat, maka urin diencerkan dengan air suling dan sekali lagi dilapisi pada reagen.

5. Urin diencerkan sampai setelah 3 menit cincin filamen tipis terbentuk.

6. Perhitungan kandungan protein dalam urin diproduksi sesuai dengan rumus:

C = 0,033 g / l x derajat pengenceran.

194.48.155.245 © studopedia.ru bukan penulis materi yang diposting. Tetapi memberikan kemungkinan penggunaan gratis. Apakah ada pelanggaran hak cipta? Kirimkan kepada kami | Umpan balik.

Nonaktifkan adBlock!
dan menyegarkan halaman (F5)
sangat diperlukan

Pengembangan metodis kelas praktis "Penentuan protein dalam urin" (1 kursus)

Pusat Pelatihan Modal
Moskow

Topik: Penentuan protein urin.

Tujuan: Untuk mempelajari studi tentang sifat kimia urin.

Untuk mempelajari metode kuantitatif dan kualitatif untuk menentukan protein urin;

Pelajari prinsip-prinsip dasar bekerja dengan strip uji pada penganalisa otomatis.

Jenis pekerjaan: praktis (6 jam)

Pelajar harus tahu:

Sampel kualitatif untuk penentuan protein.

Roberts - metode Stolnikov.

Penentuan protein 3% SSC.

Metode penentuan protein biuret (THU).

Nilai diagnostik indikator penelitian.

Siswa harus dapat:

Siapkan tempat kerja untuk pengujian urin.

Persiapkan reagen, piring, dan peralatan untuk penelitian.

Untuk menentukan sifat kimia urin (protein dalam urin dengan metode kualitatif dan kuantitatif).

Bekerja dengan produk kosong (desain formulir analisis).

Menafsirkan hasil penelitian dengan benar.

Berarti untuk mencapai tujuan:

1. Bekerja dengan catatan, literatur pendidikan dan khusus.

2. Persiapan untuk latihan praktis menggunakan rekomendasi metodologis dari guru, implementasi dan pelaksanaan kerja praktek.

3. Bekerja dengan sarana pendidikan informasi dalam media elektronik dan kertas.

Peralatan untuk ruang belajar dan workstation kantor:

kursi dengan jumlah siswa;

tempat kerja guru;

furnitur dan peralatan khusus.

Alat pelatihan teknis:

komputer untuk melengkapi tempat kerja guru dan siswa;

perangkat teknis untuk tampilan informasi audiovisual;

alat bantu pengajaran audiovisual (presentasi, video pelatihan).

Hasil dari penguasaan pelajaran adalah:

Pembentukan keterampilan profesional praktis dan pengalaman praktis awal, termasuk kompetensi profesional (PC) dan umum (QA):

PC 1.1. Siapkan tempat kerja untuk uji klinis laboratorium.

PC 1.2. Untuk melakukan studi klinis laboratorium bahan biologis.

PC 1.3. Catat hasil penelitian.

PC 1.4. Buang bahan bekas, desinfektan dan sterilkan gelas bekas laboratorium, alat, dan peralatan pelindung.

Oke 1. Memahami sifat dan signifikansi sosial dari profesi masa depan mereka, menunjukkan minat yang stabil di dalamnya.

Oke 2. Atur kegiatan Anda sendiri, pilih metode standar dan cara melakukan tugas profesional, evaluasi efektivitas dan kualitasnya.

Oke 6. Bekerja dalam tim dan tim, berkomunikasi secara efektif dengan kolega, manajemen, pasien.

OKE 9. Dipandu dalam kondisi perubahan teknologi dalam aktivitas profesional.

OK 13. Untuk mengatur tempat kerja sesuai dengan persyaratan perlindungan tenaga kerja, kebersihan industri, infeksi dan keselamatan kebakaran.

Saya modul. Bagian teoretis dengan unsur kerja mandiri

Tugas nomor 1. Pelajari dan uraikan materi pelajaran dalam buku kerja.

Orang yang sehat biasanya mengandung kurang dari 0,002 g / l dan jarang hingga 0,012 g / l protein, dan biasanya kandungan protein urin ini disebut "dalam bentuk jejak" dan tidak terdeteksi oleh metode kimia konvensional dalam urin manusia yang sehat.

Kandungan protein dalam porsi urin yang dikumpulkan pada waktu yang berbeda dalam sehari dapat sangat bervariasi.

Protein dalam urin disebut proteinuria.

Tergantung pada hilangnya protein setiap hari, derajat proteinuria berikut dibedakan: sedang - hingga 1 g; sedang - dari 1 hingga 3 g; diucapkan - lebih dari 3 g.

Ada dua jenis proteinuria:

Proteinuria, disebabkan oleh penyakit saluran kemih;

proteinuria, dengan lesi (penyakit) ginjal.

Proteinuria terkait dengan proses inflamasi saluran kemih, disertai dengan penampilan dalam urin sejumlah besar leukosit atau eritrosit, yang, bagaimanapun, tidak menghilangkan masuknya protein secara simultan dalam urin dari parenkim ginjal; kandungan protein jarang melebihi 1 g / l.

Proteinuria ginjal dalam banyak kasus dikaitkan dengan peningkatan permeabilitas glomeruli dan dibagi menjadi 2 kelompok:

Untuk proteinuria fisiologis termasuk kasus penampilan sementara protein dalam urin, tidak terkait dengan penyakit:

setelah makan sejumlah besar makanan yang kaya protein non-didenaturasi (daging mentah, telur mentah);

dengan kerja otot yang intensif (lonjakan panjang, acara olahraga);

saat mandi air dingin atau mandi;

dengan pengalaman emosional yang kuat;

dengan serangan epilepsi.

Bedakan proteinuria ortostatik, atau awet muda, terjadi pada anak-anak dan remaja dan melewati usia. Dalam hubungan diferensial - diagnostik, praktis penting bahwa albuminuria ortostatik sering ditemukan pada periode pemulihan dari glomerulonefritis akut.

Proteinuria ginjal patologis dapat menjadi hasil dari penyakit organik pada ginjal dan organ dan sistem lain: glomerulonefritis akut; glomerulonefritis kronis; pielonefritis akut; pielonefritis kronis; nefropati wanita hamil; berbagai penyakit yang berhubungan dengan demam; gagal jantung kronis yang parah; dan penyakit ginjal ringan; nefrosis lipoid; TBC ginjal; demam berdarah; vaskulitis hemoragik; anemia berat; hipertensi, dll.

Tugas nomor 2. Menulis ulang dan menggambar diagram metode laboratorium untuk menentukan protein dalam urin.

Metode laboratorium untuk penentuan protein dalam urin

Ada metode kualitatif dan kuantitatif untuk menentukan protein dalam urin, mereka didasarkan pada koagulasi protein dalam volume urin atau pada batas media (urin dan asam); sambil mengukur tingkat koagulasi membuat sampel kuantitatif.

sampel dengan asam sulfosalisilat 20% (terstandarisasi);

Tes dering Geller (saat ini tidak digunakan);

deteksi protein menggunakan kertas indikator (strip) dan strip tes.

metode Brandberg-Roberts-Stolnikov yang terpadu;

dengan asam sulfosalisilat 3%.

Metode kualitatif untuk menentukan protein dalam urin

Tugas nomor 3. Penentuan protein dalam urin menggunakan sampel standar dengan asam sulfosalisilat 20%

Prinsip metode: didasarkan pada pembekuan protein dalam volume urin atau pada batas media (urin dan asam)

Piring, peralatan, dan reagen:

20% asam sulfosalisilat (asam 2-hidroksi-5-sulfobenzoat C 7 H 5 0 6 S).

3ml urin yang disaring

2 buah tabung reaksi kimia

Tiga tabung urin yang disaring dimasukkan ke dalam dua tabung, 6-8 tetes asam sulfosalisilat ditambahkan ke salah satunya (berpengalaman). Pada latar belakang gelap kedua tabung dibandingkan.

Interpretasi hasil:

Kekeruhan dalam tabung reaksi menunjukkan adanya protein dalam urin - sampel positif.

Catatan Urin alkali diasamkan sebelum tes dengan menambahkan beberapa tetes larutan asam asetat 10%.

Tugas nomor 4. Penentuan protein menggunakan tes Geller ring

Prinsip metode: Sampel cincin didasarkan pada kenyataan bahwa ketika asam nitrat ditambahkan ke urin di antarmuka (asam - urin) di hadapan protein, itu membeku dan cincin putih muncul.

Piring, peralatan, dan reagen:

- pereaksi: larutan asam nitrat 30% (HNO 3) (d = 1,2) atau Laryonic Reactant: 20–30 g natrium klorida (NaCl) dilarutkan dalam 100 ml air suling ketika dipanaskan, didinginkan, disaring; 1 ml HNO 3 pekat ditambahkan ke 99 ml filtrat.

Ke dalam tabung tuangkan 1 - 2 ml larutan HNO 3 30% atau pereaksi Larionova dan dengan lembut lapisi jumlah yang sama dari urin yang disaring di dinding.

Interpretasi hasil:

Penampilan di perbatasan dua cairan antara menit ke-2 dan ke-3 dari cincin putih tipis menunjukkan adanya protein dalam urin.

Gambarlah skema untuk menentukan protein

Kuantifikasi protein

Prinsip metode: Sampel cincin Geller didasarkan pada kenyataan bahwa ketika asam nitrat ditambahkan ke urin di antarmuka (asam - urin) di hadapan protein, itu mengental dan cincin putih muncul.

Piring, peralatan, dan reagen:

Cairan biologis (urin);

Ke dalam tabung tuangkan 1 - 2 ml larutan HNO 3 30% atau pereaksi Larionova dan dengan lembut lapisi jumlah yang sama dari urin yang disaring di dinding.

Interpretasi hasil:

Penampilan di perbatasan dua cairan antara menit ke-2 dan ke-3
cincin putih tipis menunjukkan adanya protein pada konsentrasi sekitar 0,033 g / l. Jika cincin muncul lebih awal dari 2 menit setelah laminasi, urin harus diencerkan dengan air suling dan tes ulang dengan urin encer. Tingkat pengenceran urin dipilih tergantung pada jenis cincin, lebarnya, kekompakan dan waktu penampilan.

Dengan cincin seperti benang, yang muncul lebih awal 2 menit, urin diencerkan 2 kali, dengan yang lebar - 4 kali, dengan yang ringkas - 8 kali, dll. Konsentrasi protein dihitung dengan mengalikan pengenceran dengan 0,033 g / l.

Cincin putih dapat terbentuk ketika ada banyak urat; tidak seperti protein, ia muncul sedikit di atas batas dua cairan dan larut ketika sedikit dipanaskan.

Tugas nomor 6. Menentukan jumlah protein dalam urin dengan asam sulfosalisilat 3%

Prinsip metode ini: Konsentrasi protein dalam urin sebanding dengan kekeruhan yang terjadi ketika mengental asam sulfosalisilat

Piring, peralatan, dan reagen:

0,9% larutan natrium klorida;

1% larutan standar albumin - 1 g albumin terliofilisasi (dari serum manusia atau sapi) dilarutkan dalam sejumlah kecil larutan NaCl 0,9% dalam labu 100 ml, dan kemudian dibuat hingga tanda dengan pelarut yang sama. Pereaksi distabilkan dengan menambahkan 1 ml larutan natrium azida 5% (NaN 3). Saat disimpan dalam lemari es, reagen stabil selama 2 bulan.

1,25 ml urin yang disaring dimasukkan ke dalam tabung reaksi, ditambahkan 3,75 ml larutan asam sulfosalisilat 3% dan dicampur. Setelah 5 menit, sampel difoto pada PEC pada panjang gelombang 590-650 nm (filter lampu oranye atau merah) terhadap kontrol dalam kuvet dengan panjang jalur optik 5 mm. Kontrol berfungsi sebagai sampel di mana 3,75 ml larutan natrium klorida 0,9% ditambahkan ke 1,25 ml urin. Konsentrasi protein dihitung sesuai dengan grafik kalibrasi, untuk konstruksi yang mereka siapkan pengenceran larutan albumin standar. (lihat tabel). Dari setiap larutan encer yang diperoleh, 1,25 ml diambil dan diperlakukan sebagai sampel eksperimental.

Persiapan pengenceran untuk merencanakan kalibrasi

Solusi standar, ml

0,9% larutan natrium klorida, ml

Konsentrasi protein, g / l

Ketergantungan bujursangkar dari besarnya kepunahan dan konsentrasi protein dipertahankan hingga 1 g / l. Pada konsentrasi protein yang lebih tinggi, sampel harus diencerkan dan memperhitungkan pengenceran dalam perhitungan.

Jika ada zat yang mengandung yodium dalam urin, hasil positif palsu dapat diperoleh. Oleh karena itu, tes ini tidak dapat digunakan pada pasien yang menggunakan preparat yodium atau yang telah menjalani penelitian menggunakan senyawa radiopak yang mengandung yodium. Reaksi positif J yang salah selama penelitian dapat disebabkan oleh penggunaan obat sulfanilamide, penisilin dosis besar, dan konsentrasi tinggi dalam urin asam urat.

Gambarlah skema untuk menentukan protein

Tugas nomor 7. Deteksi Bens-Jones di Urine

Prinsip metode: berdasarkan pada reaksi termopresipitasi

Piring, peralatan, dan reagen:

Reagen: buffer 2M asetat pH 4,9.

4 ml urine yang disaring dicampur dengan 1 ml larutan buffer dan dipanaskan selama 15 menit dalam bak air pada 56 ° C.

Interpretasi hasil:

Di hadapan protein Bens-Jones dalam urin, sedimen yang tampak muncul dalam 2 menit pertama.

Ketika konsentrasi protein kurang dari 3 g / l, sampel bisa negatif, yang cukup langka, karena biasanya konsentrasi protein Bens-Jones dalam urin sangat signifikan.

Deteksi protein Bens-Jones yang paling dapat diandalkan adalah dengan presipitasi pada suhu 40-60 ° C. Namun, dalam urin yang terlalu asam (pH kurang dari 3,0) atau terlalu basa (pH lebih dari 6,5), dengan kerapatan relatif rendah dari urin dan konsentrasi rendah krem ​​Bens-Jones (kurang dari 3 g / l), sedimentasi mungkin tidak terjadi.

Gambarlah skema untuk menentukan protein

Modul II. Pekerjaan independen dengan tahap penelitian

Tugas nomor 1. Pelajari dan garis besar aplikasi №1 "Deteksi protein menggunakan strip tes diagnostik"

- Dapatkan sampel cairan biologis (urin) dari guru, beri nomor sampel;

- Lakukan tes urin menggunakan strip tes diagnostik;

- Nilai hasilnya (norma, patologi). Misalkan penyebab protein dalam urin.

- Tulis hasilnya dalam bentuk analisis, serahkan kepada guru.

"Deteksi protein menggunakan strip tes diagnostik"

Prinsip Protein mengubah warna indikator yang diterapkan pada strip. Indikator dikemas dalam satu set 100 strip, yang disimpan dalam kotak pensil yang tertutup rapat, di tempat yang sejuk dan kering.

Aturan untuk bekerja dengan strip uji diagnostik

Saat bekerja dengan strip tes diagnostik, Anda harus mematuhi aturan berikut:

- simpan strip uji diagnostik dalam kemasan tabung yang tertutup rapat;

- untuk menyimpan kasing di tempat yang gelap, kering, dingin pada suhu tidak melebihi 30º but, tetapi tidak di lemari es;

- Jangan biarkan strip terkena kelembaban dan sinar matahari langsung, suhu tinggi dan bahan kimia yang mudah menguap;

- dapatkan hanya setrip yang benar-benar diperlukan, dan kemudian segera tutup kasing;

- Jangan menyentuh zona diagnostik dengan jari Anda.

Aturan Tes

1. Untuk penelitian, gunakan urin pagi yang dikumpulkan dalam wadah urin plastik sekali pakai (atau piring kering bersih). Campur urin yang dikirim, tetapi jangan disentrifuge.

Saat menggunakan kemasan yang disesuaikan non-standar, residu deterjen dalam wadah pengumpulan urin menyebabkan hasil yang salah.

2. Dari tempat pensil, ambil strip tes.

3. Segera tutup kasing dengan penutup pabrik, lindungi strip dari kelembaban.

4. Turunkan strip kertas indikator selama 2-3 detik ke dalam urin yang sedang diperiksa dan segera lepaskan.

5. Untuk menghilangkan kelembaban berlebih dari zona diagnostik strip, jalankan dengan tepi panjang di sepanjang tepi wadah (atau wadah lain di mana urin dikirim) atau pasang tepi strip ini untuk menyaring kertas.

Tidak mungkin untuk membersihkan urin berlebih dari zona diagnostik.

6. Setelah waktu yang ditentukan pada label tabung atau dalam instruksi untuk setiap pengujian, kedaluwarsa, bandingkan warna zona diagnostik yang sesuai dengan skala warna pada label tabung dengan garis-garis (standar). Prosedur pengujian ditunjukkan pada Gambar 1-7.

7. Reaksi dinilai positif atau negatif. Atau dinyatakan secara numerik dalam g / l. (lihat gambar №8).